곽진언 자랑 다운로드

우리는 검토자의 우려에 동의 UBC 프로모터에 의한 NDEL1 발현은 CAG 프로모터보다 현저히 낮지만 여전히 과발현 상태이다. 우리는 CAG 프로모터 및 UBC 프로모터에 의한 과발현이 표현형의 구별할 수 없는 강도를 유도한다는 점을 신중하게 강조하고자 한다. 더욱이, CAG 또는 UBC 프로모터하에서 과발현된 NDEL1S332/336A는 여전히 뉴런 형태에 대한 NDEL1 녹다운 효과를 구출하지 못했다. 더욱이, CAG 프로모터에 의해 NDEL1을 단독으로 과발현할 때, 높은 발현 수준에도 불구하고 뉴런 형태 형성에 유의한 영향을 미치지 않았다(저자 반응 이미지 5), 이는 이 작품에서 나타난 뉴런 형태 형성에서 NDEL1 인포포일화에 대한 역할이 과발현 아티팩트에 기인하기 때문에 가능성이 적다는 개념을 더욱 뒷받침한다. 따라서, 우리는이 개념을 반영하기 위해 우리의 원고를 개정 (참조 소절 “NDEL1 S336 / S332의 포스 포릴은 신경 형태 형성을 조절”). 밀러 FD, 및 고티어 AS. (2007). 타이밍은 모든 것입니다: 개발 피질에 신경 대 glia를 만들기. 뉴런, 54(3), 357-369. doi:10.1016/j.neuron.2007.04.019 NDEL1 S336/S332 인산화에 대한 책임있는 키나아제 스크리닝용, FLAG-NDEL1 플라스미드 및 발현 클론 플라스미드를 HEK293 세포로 형질전환하고 48시간 동안 배양하였다. 세포를 1X ELB 용해 완충액(50 mM Tris pH 8.0, 250 mM NaCl, 5 mM EDTA, 0.1% NP-40)으로 보충하여 2 mM NaPPi, 10 mM NaF, 2 mM Na3VO4, 1 mM DTT, 및 프로테아제억제제 칵테일(Roche Mann, 독일)으로 용해시켰다. 액수액은 FLAG 항체로 면역블롯팅을 실시하였다. 후보 키나아제는 밴드 시프트에 의해 입증된 NDEL1 인산화의 증분에 의해 선택되었다.

요약하자면, 우리는 F-액틴 역학을 변조하여 뉴런 형태 형성에 대한 새로운 규제 메커니즘으로서 TARA-DYRK2-GSK3β 복합체에 의해 매개된 S336 및 S332에서 NDEL1의 순차적 인산화를 확인했습니다. NDEL1 S336/S332 인산화 또는 TARA-DYRK2-GSK3β 신호 전달 모듈의 생물학을 활용하면 뇌 발달 및 신경 발달 장애와 관련된 새로운 구성 요소 및 경로의 발견에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있습니다. 핵 분배 요소와 같은 1 (NDEL1)은 신경 발달 과정에서 다각적 인 역할을합니다 (Chansard et al., 2011). 신경계에서의 NDEL1 발현은 초기 배아 단계에서 시작되어 성인기 전반에 걸쳐 유지된다(Pei et al., 2014; 사사키 외, 2000). Ndel1의 결핍은 배아 치사 (Sasaki et al., 2005) 및 사후 연구 및 인간 유전 연구에서 정신 분열증과 같은 여러 신경 정신 질환에서 NDEL1을 연루시켰습니다 (브래드쇼와 하야시, 2017; Burdick 외, 2008; 가델라 외, 2016; 립스카 외, 2006; Nicodemus 등, 2010), 둘 다 뇌 발달에서 NDEL1 기능의 중요성을 강조. 개발 뇌에서, NDEL1 신경 전구체 증식 및 분화를 조절 (Liang et al., 2007; Stehman 외, 2007; Ye et al., 2017), 뉴런 마이그레이션(Okamoto et al., 2015; 사사키 외, 2005; 슈 외, 2004; 타키토 외, 2012; Youn et al., 2009, 및 신경 성숙 (Hayashi et al., 2010; Jiang 외, 2016; 카미야 외, 2006; Kuijpers 외, 2016; Saito 외, 2017; 심 외, 2008; 2009년). 이러한 함수는 여러 번역 후 수정(PTM)에 의해 규제되어야 하지만 그 기반이 되는 자세한 메커니즘은 아직 완전히 이해됩니다.